Metode Sterilisasi Permukaan untuk Mendapatkan Root Fungal Endofit

Untuk dapat mengisolasi fungal endophyt dari akar, hal pertama yang dilakukan adalah melakukan sterilisasi permukaan akar. Banyak metode yang dipakai dalam melakukan sterilisasi permukaan ini. Dari beberapa jurnal yang ada, beberapa peneliti menggunakan Sodium Hypercloride untuk steralisasi permukaan. Dari yang saya pelajarin di sini, Sodium Hypercloride tidak digunakan karena dianggap lebih tepat digunakan saat mengisolasi pathogen akar.

Metode yang digunakan untuk sterilisasi permukaan adalah sebagai berikut :

1.  Bersihkan akar target yang akan diisolasi dengan air mengalir hingga semua tanah tidak menempel di  akar. Terakhir cuci akar dengan air suling.

2. Rendam akar di dalam ethanol  70 % selama 1 menit

3. Rendam akar di dalam 15% H₂O₂  selama 4 menit

4. Rendam  akar dalam ethanol 70% selama 1 menit

5. Rendam akar di dalam air steril selama 5 menit

6. Rendam kembali akar di dalam air steril selama 5 menit.

Setelah semua tahapan dilakukan letakkan akar di atas kertas steril untuk menghilangkan air berlebih.  Seluruh tahapan tersebut kecuali tahapan pertama dilakukan di dalam Laminar Air Flow. Setelah semua tahap dilakukan sample akar bisa dibagi menjadi segmen-segmen dan dipindahkan ke media isolasi.