Metode Analisis Sebaran Spora Endomikoriza di Tanah

Untuk melakukan analisis sebaran spora, cara utama yang bisa dilakukan adalah dengan melakukan penghhitungan spora. Untuk mendaparkan spora dari dalam tanah, gunakan metode pada postingan sebelumnya. Spora FAM ukurannya mikroskopis sehingga perlu teknik-teknik tertentu agar perhitungan spora lebih mudah dilakukan. Untuk melakukan penghitungan spora, tahapan kegiatannnya dalah sebagai berikut 

•  Siapkan cawan petri dan tutupnya. Usahakan cawan petri yang digunakan adalah cawan petri dengan diameter kecil agar mudah melakukan pengamatan di bawah mikroskop stereo
• Buatlah gambar petak-petak berukuran 1 x 1 cm di atas plastik dengan menggunakan spidol permanen. Lalu tempatkan plastik tersebut di bawah cawan petri
•  Tandailah kotak-kotak yang sudah dibuat dengan nomer 1, 2, 3, 4, dst.
•   Setelah cawan petri siap, masukkan spora dan mulailah penghitungan di bawah mikroskop Gunakan alat bantu jarum untuk menyebar spora,agar membantu penghitungan
•  Hitung dari kotak no 1 dan seterusnya secara berurutan
•  Tabulasi data penghitungan dan jumlahkan semuanya
• Lakukan tahapan ini  pada semua sampel sehingga dapat dibandingkan kumlah spora pada titik mata angin yang berbeda dan pada kedalaman tanah yang berbeda. 

Prosedur Isolasi Spora Fungi Mikoriza Arbuskula dari Tanah

Sebelum dilakukan isolasi, tahap pertama yang perlu dilakukan adalah melakukan eksplorasi. Eksplorasi dilakukan dengan mengambil sampel tanah yang diyakini merupakan daerah produksi spora  berdasarkan informasi  nara sumber terpercaya atau literatur sesuai dengan tujuan penelitian. Tanah selanjutnya bisa disimpan ke dalam lemari pendingin. Adapun alat yang dibutuhkan pada tahap isolasi spora ini adalah Saringan bertingkat, cawan petri, lemari pendingin, label, alat tulis, timbangan, sentrifuge, glukosa, gelas piala, stirer.

Dalam melakukan tahapan isolasi spora FAM pada praktikum kali ini menggunakan sampel tanah yang sudah disimpan di Lemari pendingin . Tanah yang ada di lemari pendingin tersebut dikeluarkan. Jika tanah beku angin-anginkan terlebih dahulu agar bisa digunakan. Setelah itu, untuk isolasi spora tahapan yang bisa dilakukan adalah sebagai berikut :

1.      Tanah ditimbang sebanyak ± 50 g untuk setiap sampel


2.    Tanah yang sudah ditimbang selanjutnya dimasukkan  ke dalam gelas piala yang sudah diisi  dengan air dengan ukuran setengah tinggi gelas piala


3.     Aduk-aduk tanah hingga homogen. Tunggu beberapa detik agar partikel tanah yan besar sedikit mengendap, lalu tuang supernatan dari larutan ke dalam saringan bertingkat. Untuk membantu mempercepat proses, lakukan tahapan ini di bawah air mengalir. Pada praktikum ini, saringan bertingkat yang digunakan adalah sebanyak dua saringan dengan ukuran 125 µm dan 63 µm. Hasil saringan tersebut, kemudian masukkan lagi ke gelas piala dan lakukan tahapan yang sama hingga berulang-ulang pada masing-masing sampel


4.     Untuk mempermudah pemisahan spora dengan tanah, lakukan sentrifuge dengan bantuan larutan sukrosa 60%. Untuk melakukan sentrifuge, masukkan hasil dari saringan bertingkat ke dalam tube dan tambahakan glukosa. Selanjutnya sentrifuge selama 30 – 60 detik.


5.  Hasil sentrifuge selanjutnya diambil supernatannya saja (bagian atas larutan) dan dituangkan kembali ke dalam saringan bertingkat dengan ukuran paling kecil (63 µm), aliri dengan air. Penyiraman dengan air harus dilakukan segera untuk mencegah adanya pengaruh glukosa terhadap spora


6.    Hasil saringan selanjutnya dimasukkan ke dalam cawan petri yang sudah diberi sedikit air untuk dilakukan proses analisis atau tahapan praktikum selanjutnya


7.       Jika tahapan selanjutnya tidak dilakukan saat itu juga, cawan petri yang berisi spora dapat disimpan di lemari pendingin.


8.       Pemberian label dalam selurih tahapan ini adalah mutlak

Serangkaian tahpan tersebut dapat dilihat pada gambar sebagai berikut :