Untuk
dapat mengisolasi fungal endophyt dari akar, hal pertama yang dilakukan adalah
melakukan sterilisasi permukaan akar. Banyak metode yang dipakai dalam
melakukan sterilisasi permukaan ini. Dari beberapa jurnal yang ada, beberapa
peneliti menggunakan Sodium Hypercloride untuk steralisasi permukaan. Dari yang
saya pelajarin di sini, Sodium Hypercloride tidak digunakan karena dianggap
lebih tepat digunakan saat mengisolasi pathogen akar.
Metode
yang digunakan untuk sterilisasi permukaan adalah sebagai berikut :
1. Bersihkan
akar target yang akan diisolasi dengan air mengalir hingga semua tanah tidak
menempel di akar. Terakhir cuci akar
dengan air suling.
2. Rendam akar di dalam ethanol 70 % selama 1 menit
3. Rendam akar di dalam 15% H2O2
selama 4 menit
4. Rendam akar dalam ethanol 70% selama 1 menit
5. Rendam akar di dalam air steril selama
5 menit
6. Rendam kembali akar di dalam air steril
selama 5 menit.
Setelah
semua tahapan dilakukan letakkan akar di atas kertas steril untuk menghilangkan
air berlebih. Seluruh tahapan tersebut
kecuali tahapan pertama dilakukan di dalam Laminar Air Flow. Setelah semua
tahap dilakukan sample akar bisa dibagi menjadi segmen-segmen dan dipindahkan
ke media isolasi.
